Video: Preparing Tris Buffer 2024
TAE-Puffer ist eine Lösung aus Tris-Base, Essigsäure und EDTA (Tris-Acetat-EDTA). Es ist historisch der gebräuchlichste Puffer, der für die Agarosegelelektrophorese in den Analysen von DNA-Produkten verwendet wird, die aus PCR-Amplifikation, DNA-Reinigungsprotokollen oder DNA-Klonierungsexperimenten resultieren.
Dieser Puffer hat eine niedrige Ionenstärke und eine niedrige Pufferkapazität. Es ist am besten für die Elektrophorese von großen (> 20 kb) DNA-Stücken geeignet und muss häufig ersetzt oder für längere (> 4 h) Gellaufzeiten rezirkuliert werden.
In diesem Zusammenhang möchten Sie möglicherweise mehrere Stapel des Puffers berücksichtigen.
Angesichts der Tatsache, dass der Puffer einfach herzustellen ist und die Schritte schnell ausgeführt werden können, sollte es nicht besonders zeitaufwendig oder schwierig sein, mehr als eine Charge gleichzeitig durchzuführen. Mit den folgenden Anweisungen sollte der TAE-Puffer nur 30 Minuten benötigen. So geht's:
Bereiten Sie eine Stammlösung von EDTA
vor. Eine EDTA-Lösung (Ethylendiamintetraessigsäure) wird vorab hergestellt. EDTA geht erst dann vollständig in eine Lösung, wenn der pH-Wert auf etwa 8,0 eingestellt ist. Für eine 500-Milliliter-Stammlösung von 0,5 M EDTA werden 93,05 g EDTA-Dinatriumsalz (FW = 372) abgewogen. ). In 400 ml deionisiertem Wasser lösen und den pH-Wert mit Natriumhydroxid (NaOH) einstellen. Fülle die Lösung auf ein Endvolumen von 500 Milliliter auf.
Eine Stammlösung von TAE
aufpeitschen Eine konzentrierte (50fache) Stammlösung von TAE herstellen, indem 242 Gramm der Tris-Base (FW = 121. 14) abgewogen und in etwa 750 aufgelöst werden. Milliliter entionisiertes Wasser.
Geben Sie vorsichtig 57. 1 Milliliter Eisessig und 100 Milliliter 0,5 M EDTA (pH 8,0) zu. Danach die Lösung auf ein Endvolumen von 1 Liter einstellen. Diese Stammlösung kann bei Raumtemperatur gelagert werden. Der pH-Wert dieses Puffers ist nicht eingestellt und sollte etwa 8,5 betragen.
Bereiten Sie eine Arbeitslösung von TAE
vor. Die Arbeitslösung von 1 × TAE-Puffer wird durch einfaches Verdünnen der Stammlösung mit 50-fachem entionisiertem Wasser hergestellt.
Die Endkonzentration der gelösten Stoffe beträgt 40 mM. Tris-Acetat und 1 mM EDTA. Der Puffer ist nun bereit für den Betrieb eines Agarosegels.
Was Sie für den Puffer benötigen
Da die Erstellung des TAE-Puffers nur einen schnellen und einfachen Satz von Anweisungen erfordert, ist die Menge der dafür benötigten Materialien nicht übermäßig. Sie brauchen nur EDTA-Dinatriumsalz, Tris-Base und Eisessig.
Für die Herstellung des Puffers sind je nach Bedarf auch ein pH-Meter und Kalibrierungsstandards erforderlich. Sie benötigen außerdem 600 Milliliter und 1500 Milliliter Becher oder Flaschen sowie Messzylinder. Schließlich brauchen Sie deionisiertes Wasser, rühren Riegel und rühren Platten.
Einpacken
Wo planen Sie, den Puffer zu erstellen - auf einem Schulgelände, einem Arbeitsplatz oder an einem anderen Ort, z. B. in Ihrem Zuhause?Überprüfen Sie das Inventar, bevor Sie beginnen, sicherzustellen, dass alle oben genannten Materialien für den TAE-Puffer vorhanden sind.
Wenn Sie nicht für Materialien zahlen möchten, empfiehlt es sich, den Puffer außerhalb Ihres Hauses zu verwenden. Sie können ganz einfach die benötigten Materialien online bestellen oder ein Fachgeschäft für sie besuchen.
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