Wie man TBE-Puffer in 3 einfachen Schritten

TBE-Puffer ist eine Pufferlösung, die aus Tris-Base, Borsäure und EDTA (oder Tris-Borat-EDTA zusammen) besteht. Dieser Puffer wird häufig für die Agarosegelelektrophorese bei der Analyse von DNA-Produkten verwendet, die aus PCR-Amplifikation, DNA-Reinigungsprotokollen oder DNA-Klonierungsexperimenten resultieren.

TBE-Puffer ist besonders nützlich für die Trennung von kleineren DNA-Fragmenten (MW <1000), wie kleine Produkte von Restriktionsenzymverdaus.

TBE hat eine höhere Pufferkapazität und liefert eine schärfere Auflösung als TAE-Puffer. TAE-Puffer ist eine Lösung aus Tris-Base, Essigsäure und EDTA (Tris-Acetat-EDTA).

TBE ist im Allgemeinen teurer als TAE und inhibiert DNA-Ligase, was Probleme verursachen kann, wenn nachfolgende DNA-Reinigungs- und Ligierungsschritte beabsichtigt sind. Erfahren Sie in den folgenden drei einfachen Schritten, wie Sie TBE-Puffer erstellen. Es sollte nicht länger als etwa 30 Minuten dauern, um diesen Puffer zu erstellen. So geht's:

Bereiten Sie eine Stammlösung von EDTA

vor. Eine EDTA-Lösung (Ethylendiamintetraessigsäure) sollte vorab hergestellt werden. EDTA geht nicht vollständig in Lösung, bis der pH-Wert auf etwa 8,0 eingestellt ist. Für eine 500-Milliliter-Stammlösung von 0,5 M EDTA werden 93,05 g EDTA-Dinatriumsalz (FW = 372,2) abgewogen. Dann löst man es in 400 ml deionisiertem Wasser und stellt den pH-Wert mit NaOH ein. Danach die Lösung auf ein Endvolumen von 500 Milliliter auffüllen.

Bereiten Sie eine Stammlösung von TBE

vor Machen Sie eine konzentrierte (5x) Stammlösung von TBE durch Wiegen von 54 g Tris Base (FW = 121. 14) und 27. 5 g Borsäure (FW = 61. 83) und lösen sich beide in etwa 900 Milliliter entionisiertem Wasser. Dann werden 20 Milliliter 0,5 M EDTA (pH 8,0) zugegeben und die Lösung auf ein Endvolumen von 1 Liter eingestellt.

Diese Lösung kann bei Raumtemperatur gelagert werden, in älteren Lösungen bildet sich jedoch ein Niederschlag. Lagern Sie den Puffer in Glasflaschen und entsorgen Sie ihn, wenn sich ein Niederschlag gebildet hat.

Bereiten Sie eine Arbeitslösung mit TBE vor

Für die Agarosegelelektrophorese kann ein TBE-Puffer in einer Konzentration von 0,5-fach (1: 10-Verdünnung des konzentrierten Stamms) verwendet werden. Verdünne die Stammlösung 10-mal in entionisiertem Wasser. Die Endkonzentrationen an gelöstem Material sind 45 mM Tris-Borat und 1 mM EDTA. Der Puffer ist nun bereit für den Betrieb eines Agarosegels.

Was Sie benötigen

Um TBE-Puffer herzustellen, benötigen Sie nur vier Substanzen. Die restlichen Gegenstände auf dieser Liste sind Ausrüstung. Die vier benötigten Substanzen sind EDTA-Dinatriumsalz, Tris-Base, Borsäure und entionisiertes Wasser.

Was die Ausrüstung angeht, benötigen Sie ein pH-Meter und gegebenenfalls Kalibrierungsstandards. Dazu brauchst du 600-Milliliter- und 1500-Milliliter-Becher oder -Flaschen. Abgerundet werden Ihre Geräte mit Messzylinder und Rührstäben sowie Rührplatten.

Überprüfen Sie das Inventar in dem Labor, das Sie verwenden werden, um sicherzustellen, dass Sie alles haben, was Sie brauchen, bevor Sie beginnen. Nichts ist schlimmer, als mitten in der Vorbereitung einer Lösung stehen zu bleiben, weil Ihnen die richtigen Materialien ausgegangen sind.

Wenn sich Ihr Labor in der Schule oder an Ihrem Arbeitsplatz befindet, erkundigen Sie sich beim zuständigen Personal, ob alle Artikel im Lager vorhanden sind. Dadurch könnten Sie am Ende Zeit und Energie sparen.